MagBead Blood DNA Kit 磁珠法全血DNA提取试剂盒

产品内容

	MD005-100	MD005-400
Component	100 preps	400 preps
Buffer BL	20ml	80mL
去蛋白液	80ml	320ml
蛋白酶K	20mg	80mg
Magbeads	5ml	20ml

产品简介

该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的用于全血DNA提取的方法，提取效率比传统方法更高。全血在蛋白酶K与裂解液共同作用下彻底裂解释放基因组DNA，加入乙醇后DNA被磁珠特异性吸附。经漂洗后，洗脱得到的纯净的血液基因组DNA，可用于测序、酶切、PCR、克隆等下游实验。

该试剂盒可与自动化工作站或磁棒法自动磁珠提取系统配套使用，简单、快速地进行大规模提取，大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。

自备仪器、试剂

1．手动单管提取：

1）漩涡仪

2）磁力架

3）异丙醇

2．手动96孔深孔板提取：

1）恒温混匀摇床

2）96孔板磁力架

3）8通道移液器

4）异丙醇

实验前准备及重要注意事项

1．准备好75%的乙醇.

2．向蛋白酶K中加入指定体积的无菌水，短时间内使用4℃保存，-20℃长期保存。

3．Magbeads使用前需涡旋震荡20秒使其充分混匀。

操作步骤

一、手动单管操作

1．取200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，放入1.5ml离心管, 加入200μl裂解液BL，涡旋震荡混匀，再加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，颠倒混匀，55℃水浴10分钟。

2．加入200μl 异丙醇，涡旋震荡混匀15秒钟，向离心管中加入50μl充分混匀的Magbeads，涡旋震荡10秒钟后静置1分钟。

3．将离心管放于磁力架上静置1分钟，期间连同磁力架期间颠倒几次，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液（颠倒几次目的是管壁和盖子上的磁珠全部回收）。

4．取出磁力架的磁条，向离心管中加入800μl 去蛋白液震荡混匀10秒钟。插入磁条静置1分钟，期间连同磁力架期间颠倒几次，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液彻底弃去溶液。

5．取出磁力架的磁条，向离心管中加入800μl 75%乙醇震荡混匀10秒钟。插入磁条静置1分钟，期间连同磁力架期间颠倒几次，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液彻底弃去溶液。

6．重复步骤4。

7．保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置3-5分钟，使乙醇挥发干净。

注意：如果离心管侧壁上有液珠，可短暂离心将残液收集到离心管底部，（再将离

心管固定于磁力架上彻底弃去残液。

8. 取出磁条，每管加入30-100 μl 去离子水。吹打混匀室静置1分钟，（放于50℃水浴锅中孵育1分钟，可提高洗脱效率）。

9. 插入磁条静置1-2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后，用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

二、手动96孔板操作

1．取200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，到2 ml 96孔深孔板（简称“深孔板”）， 加入200μl裂解液BL，放到震荡摇床震荡混匀1分钟，再加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，震荡混匀1分钟，55℃水浴10分钟。

2．加入200μl 异丙醇，震荡摇床震荡混匀1分钟，每孔中加入充分混匀的50μl充分混匀的Magbeads，震荡混匀1分钟后，静置1分钟。

3．将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置1-2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液。

4．用手动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入800 μl 75%乙醇，之后放于混匀摇床上震荡混匀30秒钟。

5．将深孔板从混匀摇床上取下后放于96孔板磁力架上静置1分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。

6．重复步骤5两次。

7．保持深孔板固定于96孔板磁力架上，将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置3-5分钟。

8．保持深孔板固定于96孔板磁力架上，将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置1分钟。后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于60℃烘箱中放置3-5分钟，彻底除去乙醇。

9．用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入50-100 μl Buffer 去离子水，后置于混匀摇床上混匀30秒，静置1分钟。

10.将深孔板从混匀摇床上取下后放于96孔板磁力架上静置1-2分钟，用8通道移液器溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。