MagBead Blood DNA Kit 磁珠法全血DNA提取试剂盒 |
产品内容
MD005-100
MD005-400
Component
100 preps
400 preps
Buffer BL
20ml
80mL
去蛋白液
80ml
320ml
蛋白酶K
20mg
80mg
Magbeads
5ml
20ml
产品简介
该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的用于全血DNA提取的方法,提取效率比传统方法更高。全血在蛋白酶K与裂解液共同作用下彻底裂解释放基因组DNA,加入乙醇后DNA被磁珠特异性吸附。经漂洗后,洗脱得到的纯净的血液基因组DNA,可用于测序、酶切、PCR、克隆等下游实验。
该试剂盒可与自动化工作站或磁棒法自动磁珠提取系统配套使用,简单、快速地进行大规模提取,大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。
自备仪器、试剂
1.手动单管提取:
1)漩涡仪
2)磁力架
3)异丙醇
2.手动96孔深孔板提取:
1)恒温混匀摇床
2)96孔板磁力架
3)8通道移液器
4)异丙醇
实验前准备及重要注意事项
1.准备好75%的乙醇.
2.向蛋白酶K中加入指定体积的无菌水,短时间内使用4℃保存,-20℃长期保存。
3.Magbeads使用前需涡旋震荡20秒使其充分混匀。
操作步骤
一、手动单管操作
1.取200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,放入1.5ml离心管, 加入200μl裂解液BL,涡旋震荡混匀,再加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液,颠倒混匀,55℃水浴10分钟。
2.加入200μl 异丙醇,涡旋震荡混匀15秒钟,向离心管中加入50μl充分混匀的Magbeads,涡旋震荡10秒钟后静置1分钟。
3.将离心管放于磁力架上静置1分钟,期间连同磁力架期间颠倒几次,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(颠倒几次目的是管壁和盖子上的磁珠全部回收)。
4.取出磁力架的磁条,向离心管中加入800μl 去蛋白液震荡混匀10秒钟。插入磁条静置1分钟,期间连同磁力架期间颠倒几次,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液彻底弃去溶液。
5.取出磁力架的磁条,向离心管中加入800μl 75%乙醇震荡混匀10秒钟。插入磁条静置1分钟,期间连同磁力架期间颠倒几次,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液彻底弃去溶液。
6.重复步骤4。
7.保持离心管固定于磁力架上,用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液,之后室温放置3-5分钟,使乙醇挥发干净。
注意:如果离心管侧壁上有液珠,可短暂离心将残液收集到离心管底部,(再将离
心管固定于磁力架上彻底弃去残液。
8. 取出磁条,每管加入30-100 μl 去离子水。吹打混匀室静置1分钟,(放于50℃水浴锅中孵育1分钟,可提高洗脱效率)。
9. 插入磁条静置1-2分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后,用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。
二、手动96孔板操作
1.取200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,到2 ml 96孔深孔板(简称“深孔板”), 加入200μl裂解液BL,放到震荡摇床震荡混匀1分钟,再加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液,震荡混匀1分钟,55℃水浴10分钟。
2.加入200μl 异丙醇,震荡摇床震荡混匀1分钟,每孔中加入充分混匀的50μl充分混匀的Magbeads,震荡混匀1分钟后,静置1分钟。
3.将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置1-2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液。
4.用手动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入800 μl 75%乙醇,之后放于混匀摇床上震荡混匀30秒钟。
5.将深孔板从混匀摇床上取下后放于96孔板磁力架上静置1分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
6.重复步骤5两次。
7.保持深孔板固定于96孔板磁力架上,将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置3-5分钟。
8.保持深孔板固定于96孔板磁力架上,将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置1分钟。后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于60℃烘箱中放置3-5分钟,彻底除去乙醇。
9.用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入50-100 μl Buffer 去离子水,后置于混匀摇床上混匀30秒,静置1分钟。
10.将深孔板从混匀摇床上取下后放于96孔板磁力架上静置1-2分钟,用8通道移液器溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。